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主要内容

原核生物繁殖与生物技术

原核生物如何通过二分裂繁殖。在分子生物学研究中 E. coli 细菌的用途。

要点:

  • 原核生物 (细菌和古细菌) 通过 二分裂 无性繁殖。大多数原核生物繁殖迅速。
  • 由于其快速的增长速度和简单的基因遗传,大肠杆菌 被广泛用于分子生物学。
  • 在实验室中,基因可以通过一个称为 质粒的环形DNA分子转入 大肠杆菌 。细菌接收质粒的过程被称为 转化
  • 转化后的 大肠杆菌 可用于制作许多质粒拷贝。在某些情况下,它们还将表达质粒上的基因,并使生产蛋白质。

介绍

假如你有一个细菌。你怎么能够获得更多的相同的细菌?你能够多快得到它们?最重要的是,你究竟为什么 想要 这么一大堆相同的细菌呢?
让我们快进到最后一个问题:一些细菌,特别是大肠杆菌 Escherichia coli (E.coli),被广泛用于分子生物实验室,其中一些细菌作为小“工厂”来生产大量所需的DNA分子,或者许多所需的蛋白质分子(例如糖尿病患者用于调解血糖的胰岛素)。细菌越多,制造出来的DNA或者蛋白质产品就越多。
大肠杆菌 的两个特点让它在实验室里非常有用:快速繁殖,及其生成克隆,或者说基因完全相同细菌。让我们快速地看看 E. coli 和其他原核生物是如何繁殖的。然后,我们将研究它们在生物技术方面的应用。

原核生物如何复制?

原核生物通过一个名为 二分裂 的细胞分裂过程来复制。就像在真核生物中的有丝分裂一样,这个过程涉及复制染色体并将一个细胞分为两个。
二分裂是一种 无性 繁殖方式,这意味着它不涉及卵子和精子的生产和混合两个个体的遗传物质。除非有罕见的突变,也就是说除非DNA序列中发生变化,二分裂生产的子细胞与母细胞在基因上完全相同。
你可以在细胞分裂部分的 二分裂 文章中了解更多关于二分裂的步骤的内容。

原核生物复制很快!

一般原核生物的繁殖速度比多细胞真核生物要快很多。这可以被 世代时间来衡量,即一代出生到下一代出生之间的时间长度。
对人类来说,典型世代时间可能在 20 年左右。对于一个典型的细菌,这时间可能接近 20 分钟! 事实上,生活在你的肚子里,并且也在实验室研究中广泛使用的 E. coli 细菌可以每差不多 17 分钟产生新的一代1
并非所有细菌都像这样快,一些像结核杆菌 Mycobacterium tuberculosis 的病原体,世代时间超过 12 小时1。不过,原核生物一般都快速倍增,也就是说它们的种群可以非常快地增大——在自然环境下或者,在某些情况下,在实验室的一个试管里。

分子生物学中的细菌

这些细菌繁殖迅速,易在实验室生长,使它们成为很多科学研究中良好的模式生物。 例如 E. coli 就是生物研究中最为广泛使用的生物之一。
虽然你可能已经听说过 E. coli 是一种食物污染物,但是 E. coli 的无害菌株在世界各地的生物实验室中使用。事实上,许多基本生物过程都是首先在 E. coli 中发现的,例如DNA复制机制。

E. coli 作为DNA和蛋白质工厂

如今,E. coli 有时被用作微小的“工厂”来合成DNA或者蛋白质。研究员们可以通过被称为 转化 (从环境中摄取DNA)的过程将一段目标基因插入E. coli 细胞中。原核生物的遗传变异 一文更详细地描述了这一过程。在这些实验中,目标基因通常被叫做质粒的一小段环形DNA所携带,质粒可以被细菌复制并且遗传到它的后代。
转化细菌所需的质粒。它是一个环形DNA分子,含有目标基因(如胰岛素基因,在生产重组胰岛素的情况下)、一个驱动目标基因表达的启动子和一个抗生素抗性基因。
一旦它们含有目标基因的质粒,E. coli 细胞就会复制它并且在每次分裂时传递下去,制作质粒DNA具有许多拷贝。如果质粒含有合适的调控序列, E. coli 也可以被指示去转录并翻译目标基因,生产蛋白质。例如,糖尿病患者使用的大部分胰岛素都是用这一策略在 E. coli 细胞中生产出来的。

转化的步骤

在一个典型的转化实验当中,目标基因(图中的蓝色DNA)首先被插入质粒。除了目标基因之外,质粒还包括一个可以使细菌对某一特定抗生素具有耐药性的基因(图中的红色DNA)。如果我们的目的是使用细菌来合成蛋白质,这些质粒也将包含一个 启动子,或者说调控序列(图中的绿色DNA),从而使目标基因能够在细菌中表达。
如果质粒拷贝和 E. coli 细胞混合在一起,并且细胞被热冲击(短暂暴露在高温之下),其中一小部分细菌会接收质粒。所有的 E. coli 随后都被铺开在一个含有抗生素的培养皿上。抗生素的目的是只让携带质粒的细菌存活下来,并且继续生长。
细菌转化步骤。
  1. 质粒被添加到细菌中。
  2. 热冲击触发细菌接收质粒。大多数细菌并不接收质粒,只有少数几个。
  3. 所有细菌都被放在抗生素培养皿上。
  4. 只有带有质粒的细菌可以生存。每一个都生殖并形成一个菌落。
  5. 一个菌落被培养来制作更多的相同的细菌。细菌被诱导生产目标蛋白质如胰岛素。
没有质粒的 E. coli 会被抗生素杀死,而具有质粒的 E. coli 可以生存并生殖(多亏了质粒中的抗生素抗性基因)。每个耐药细胞将形成一个基因相同的细菌组成的菌落,在琼脂平板上看上去像一个小点。一个耐抗生素的菌落可以被分析(用其他方法来检查,以确认该菌落含有正确的质粒),然后培养大量相同的、携带质粒的细菌。
培养大量携带质粒的细菌有什么用?有时,研究人员需要许多质粒DNA来供另一个实验使用,他们可以从这个培养物中提取DNA。或者,如果质粒含有合适的启动子,则细菌则可以被诱导来表达基因并合成蛋白质。这种技术被用来生产一些在医学上很重要的蛋白质,例如胰岛素和人类生长激素。

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